金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)表达多种毒力因子和侵袭性酶，具有较强的致病力，是一种常见的病原菌。SA可导致人类多部位感染，如菌血症，皮肤、软组织感染，心内膜炎等^[1]。随着抗菌药物的广泛使用，SA对多种抗菌药物的耐药率逐年上升，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)，已成为严重公共卫生问题。PVL基因可编码导致白细胞溶解及组织坏死的膜成孔毒素，使MRSA具有高毒力^[2-3]。不同地区与人群分离的SA临床特征及耐药趋势有差异，监测某地区儿童SA分离情况、耐药趋势及流行病学特征，可为临床合理使用抗菌药物及控制医院感染提供依据。

1 材料与方法 1.1 菌株来源

2016—2021年苏州某儿童医院共检出SA 4 967株，随机选取其中161株MRSA进行相关基因分型及耐药基因检测。

1.2 细菌鉴定与药物敏感性试验

所有临床标本分离培养均按照《全国临床检验操作规程》^[3]进行，细菌鉴定使用布鲁克细菌鉴定质谱仪(MALDI Biotyper，德国布鲁克公司)。药物敏感性试验采用仪器法(VITEK 2 Compact，法国梅里埃公司)及纸片扩散法，结果以美国临床实验室标准化协会2020年标准^[4]判定。纸片扩散法培养基为Mueller-Hinton(MH)琼脂平板(安图生物有限公司)，质控菌株为SA ATCC 25923、ATCC 29213。

1.3 基因检测 1.3.1 DNA提取

DNA提取采用生工Sangon Biotech Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，提取的DNA于-20℃保存。

1.3.2 基因扩增

PCR引物信息见表 1。PCR反应体系：上下游引物各1 μL，10×缓冲液2 μL，模板1 μL，Taq酶0.25 μL，dNTP 2 μL，用灭菌蒸馏水补至20 μL。PCR扩增参数为：94℃预变性4 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸50 s，共35个循环，最后72℃延伸10 min。PCR产物5 μL点样于1.5%的琼脂糖凝胶中，100 V电泳45 min，通过紫外凝胶成像系统观察结果。

1.4 统计分析

数据统计应用SPSS 16.0软件，两组间比较采用χ²检验。检出水准α=0.05。

2 结果 2.1 不同年份及季节SA及MRSA检出情况

2016—2021年，该院共检出SA 4 967株，其中，MRSA检出1 730株(34.83%)。2019年检出MRSA最多(443株)，2018年MRSA检出率(39.25%)最高。2016—2021年MRSA检出率依次为28.27%(203/718)、32.28%(255/790)、39.25%(400/1 019)、38.79%(443/1 142)、30.92%(222/718)和35.69%(207/580)。从季节分布来看，SA全年均可检出，不同季节MRSA检出率比较，差异无统计学意义(χ²=0.992，P=0.803)，见表 2。

2.2 不同标本中SA及MRSA检出情况

2016—2021年，SA及MRSA检出株数最多的标本均为痰，不同标本中MRSA检出率比较，差异无统计学意义(χ²=16.800，P=0.603)。见表 3。

2.3 不同患儿SA及MRSA检出情况

2016—2021年，该院住院患儿共检出SA 3 796株(76.42%)，其中MRSA 1 346株，检出率35.46%，不同年份住院患儿MRSA检出率比较，差异有统计学意义(χ²=23.770，P=0.001)。门诊患儿共检出SA 1 171株(23.58%)，其中MRSA 384株，检出率32.79%，不同年份门诊患儿MRSA检出率比较，差异无统计学意义(χ²=1.731，P=0.885)。见表 4。SA感染患儿的男女比例为1.42 ∶1，MRSA感染患儿男女比例为1.44 ∶1。

2.4 不同科室及不同年龄段患儿SA及MRSA检出情况

该院SA及MRSA检出最多的科室为呼吸科，MRSA检出率从高到低依次为神经内科(66.67%，4/6)、神经外科(59.09%，13/22)、耳鼻喉科(54.05%，20/37)、其他内科(45.00%，72/160)、急诊病区(43.68%，38/87)、心内科(42.86%，42/98)、消化内科(41.18%，21/51)、呼吸内科(36.37%，447/1 229)、感染疾病科(35.90%，56/ 156)、肾脏内科(33.94%，37/109)、血液科(33.59%，44/131)、耳鼻喉门诊(33.51%，376/1 122)、ICU(32.87%，143/435)、新生儿科(32.54%，288/885)、外科(31.56%，89/282)、泌尿外科(30.77%，4/13)、骨科(29.47%，28/95)、门诊外科(26.67%，4/15)和门诊内科(15.38%，4/26)。皮肤科检出SA 7株，烧伤整形科检出SA 1株，两科室均无MRSA检出。不同年龄段患儿MRSA检出率比较，差异无统计学意义(χ²=7.960，P=0.241)。见表 5。

2.5 MRSA和MSSA耐药情况

检出的SA对青霉素耐药率较高。MRSA对红霉素、四环素的耐药率高于甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)，但对复方磺胺甲唑、环丙沙星、莫西沙星、庆大霉素、左氧氟沙星及可诱导的克林霉素耐药率低于MSSA。未发现对万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺耐药的菌株。见表 6。

2.6 MRSA基因检测结果

161株MRSA全部表达mecA基因，未检出PVL基因。SCCmec基因分型显示以Ⅱ型为主(63.98%)，其次是Ⅴ、Ⅲ型。见表 7。

3 讨论

SA是临床检出数量最多的革兰阳性菌。由于抗菌药物的广泛使用，MRSA的检出率居高不下。2016—2021年，该儿童医院共检出SA 4 967株，MRSA平均检出率为34.83%，低于成人医院检出率^[4]，提示即使同一地区，不同医院间成人和儿童MRSA的检出率也存在差异, 可能与用药习惯、标本来源等有关。2016—2018年，MRSA检出率呈上升趋势，2019年出现下降。所以，及时监测该院儿童MRSA的检出与分布情况有利于临床治疗与防控。

SA广泛分布于人体皮肤及鼻咽部。本研究显示，检出SA及MRSA最多的标本是痰，其次是耳脓、脓液，与其他地区研究^[5]认为呼吸道标本是SA主要来源的结果一致，但MRSA在各类标本中的检出率差异无统计学意义。检出SA及MRSA最多的科室是呼吸科，其次是耳鼻喉门诊及新生儿科。呼吸科送检的痰等标本数量较多，所以SA及MRSA检出数量也较多。本研究中，耳脓标本检出数量也较多，可能儿童易发生上呼吸道感染并发中耳炎感染，而SA是儿童中耳炎的主要致病菌^[6-7]。因此，预防和控制SA感染需要加强儿童呼吸道及相关易感部位的感染控制。此外，不同季节、不同年龄段患儿、门诊患儿不同年份的MRSA检出率差异无统计学意义；住院患儿可能由于病情严重接受抗菌药物治疗而降低检出率，或因有创检查导致检出率增加，其不同年份间MRSA检出率比较，差异有统计学意义，提示MRSA的防控无季节、年龄偏向性，社区防控与医院防控同样重要。

本研究显示，SA对青霉素及红霉素的耐药率较高，未检出万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺的耐药菌株。MRSA对大环内酯类、四环素类的耐药率高于MSSA(P < 0.01)，但对喹诺酮类、氨基糖苷类、复方磺胺甲唑耐药率低于MSSA组(P < 0.01)，而成人MRSA对多种抗菌药物的耐药性往往高于MSSA^[5]。

MRSA耐药是由于SA携带mecA、mecB、mecC、mecD等基因，编码了对β-内酰胺类抗生素亲和力较低的青霉素结合蛋白^[8]。本研究随机选取的161株MRSA全部表达mecA基因，提示该院MRSA主要携带mecA基因。mecA基因位于可移动元件SCCmec上，而SCCmec元件在菌株间进行水平转移是导致SA耐药性增加的原因之一^[9]。不同地区MRSA流行的SCCmec基因型存在差异，如徐州地区以SCCmec Ⅱ为主，其次为SCCmec Ⅲ及SCCmec Ⅳ^[10]，而本研究显示，苏州地区儿童检出的MRSA以SCCmec Ⅱ(63.98%)为主，其次为SCCmec Ⅴ(16.77%)、SCCmec Ⅲ(12.42%)。研究^[11]认为SCCmec Ⅰ、SCCmec Ⅱ、SCCmec Ⅲ主要为医院获得性MRSA，而SCCmec Ⅳ及SCCmec Ⅴ主要为社区获得性MRSA。夏雯等^[12]发现某院ICU检出的MRSA中，毒力基因PVL检出率达65.22%，而罗伯特·科赫研究所的国家葡萄球菌和肠球菌参考中心(Wernigerode部分)2005—2006年间检出的4 815株MRSA中，PVL阳性菌株比例较低，仅117株(2.4%)^[13]，与本研究结果(0/161)类似。因此，推断本地区儿童感染的MRSA毒力较成人检出株弱，但或与本研究入选的菌株数量有限有关。SCCmec分型结果提示，阻止MRSA在儿童之间传播，除了加强医院内感染控制，还应加强社区卫生健康教育，减少社区获得性MRSA的播散。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。