目的了解某院中段尿标本分离病原菌及其对抗菌药物的耐药性，为临床抗菌治疗提供实验室参考依据。方法对该院2012年10月1日—2015年9月30日临床送检的中段尿标本分离病原菌进行鉴定和药敏试验，应用WHONET 5.6软件对药敏结果进行分析。结果1 501份中段尿标本共检出病原菌658株，其中革兰阳性菌151株，占22.95%，以凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌为主；革兰阴性菌456株，占69.30%，其中大肠埃希菌占45.44%；真菌51株，占7.75%。病原菌对常用抗菌药物耐药性差异较大，其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌中超广谱β内酰胺酶（ESBLs）菌株的检出率分别为52.84%、41.67%和33.33%，ESBLs菌株的耐药性高于非产超广谱β内酰胺酶菌株。结论该院中段尿标本分离的病原菌以大肠埃希菌为主，分离菌株对常用抗菌药物耐药严重。